01

OD600的應(yīng)用

OD600是指在600nm波長(zhǎng)處的吸光度，常常被用于表示細(xì)菌液體培養(yǎng)液中的細(xì)菌濃度。在細(xì)菌連續(xù)培養(yǎng)過(guò)程中，在不同的時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)菌液的OD600值，然后以時(shí)間為橫坐標(biāo)，OD600為縱坐標(biāo)，描繪細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線。結(jié)合生長(zhǎng)曲線，可以評(píng)估細(xì)菌所處的生長(zhǎng)階段，進(jìn)而可以確定合適的誘導(dǎo)表達(dá)或收獲的時(shí)間點(diǎn)。

圖1 大腸桿菌生長(zhǎng)曲線

02

OD600的檢測(cè)原理

菌液是一種非均相的懸濁液，當(dāng)入射光照射在菌液上時(shí)，光線被細(xì)菌（菌體）所散射，所以儀器檢測(cè)到的“吸光度”實(shí)際上是由散射和吸收綜合作用產(chǎn)生的，而不是如均相溶液中一般是由于溶質(zhì)分子光吸收引起的。

當(dāng)使用不同型號(hào)的設(shè)備來(lái)檢測(cè)同一樣本的吸光度時(shí)，可能會(huì)得到不同的OD600，這與儀器的光路設(shè)計(jì)有關(guān)。儀器的檢測(cè)器與樣本之間的距離（d）和檢測(cè)器的大?。≧）都會(huì)對(duì)吸光度產(chǎn)生影響。如圖2所示，當(dāng)檢測(cè)器位于d1時(shí)，散射光可以被檢測(cè)器接收到，此時(shí)吸光度較小，而當(dāng)檢測(cè)器位于d2時(shí)，光不能被檢測(cè)器接收到，此時(shí)吸光度較大。

圖2 菌液光散射的示意圖（Stevenson et.al,2016）

03

使用不同的設(shè)備檢測(cè)OD600

不同設(shè)備檢測(cè)到的OD600不能直接比較。如圖3所示，使用5個(gè)型號(hào)的設(shè)備（Biomat3，ND 2000 A，ND 2000 B，Genesys，Beckman DU530）分別對(duì)不同稀釋倍數(shù)（X1，X2，X5，X10）的樣本進(jìn)行OD600檢測(cè)。結(jié)果顯示不同的設(shè)備對(duì)同一樣本的OD600檢測(cè)值不一樣。如果需要比較不同設(shè)備間的OD600值，需要先確定相同樣品在不同設(shè)備上檢測(cè)得到的吸光度值之間的恒定偏差或者比率，然后進(jìn)行校準(zhǔn)。

圖3 不同型號(hào)的儀器OD600檢測(cè)結(jié)果（Stevenson et.al,2016）

因此當(dāng)進(jìn)行細(xì)菌菌株篩選、培養(yǎng)基優(yōu)化、添加劑評(píng)估等需要比較微生物生長(zhǎng)曲線的研究工作時(shí)，最好選擇同一型號(hào)的設(shè)備進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，保證實(shí)驗(yàn)條件的一致性。

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